双染检测（Dual staining）是一种基于生物标志物的新型检测技术。它通过在同一个细胞样本上同时使用两种特定的抗体进行染色，来更准确地识别宫颈细胞是否发生了与癌症相关的病变。在正常的生理状态下，细胞周期调控（p16相关的抑癌功能）和细胞增殖（Ki-67代表的活跃分裂）是相互排斥的，一个细胞不会同时高表达这两种蛋白。如果在显微镜下看到同一个细胞的细胞核（或细胞质/核）同时显示p16染色和Ki-67染色，这表明该细胞的细胞周期已经失控。相比传统的宫颈癌筛查方法（如单纯的细胞学检测或单独检测p16），双染检测具有更高的特异性，常用于对高危型HPV检测呈阳性，但细胞学检测结果不明确的患者进行“分流”。如果双染阳性，意味着存在真正需要关注的癌前病变的风险较高，患者需要立即进行阴道镜检查。
双染检测（Dual staining）是一种基于生物标志物的新型检测技术。它通过在同一个细胞样本上同时使用两种特定的抗体进行染色，来更准确地识别宫颈细胞是否发生了与癌症相关的病变。在正常的生理状态下，细胞周期调控（p16相关的抑癌功能）和细胞增殖（Ki-67代表的活跃分裂）是相互排斥的，一个细胞不会同时高表达这两种蛋白。如果在显微镜下看到同一个细胞的细胞核（或细胞质/核）同时显示p16染色和Ki-67染色，这表明该细胞的细胞周期已经失控。相比传统的宫颈癌筛查方法（如单纯的细胞学检测或单独检测p16），双染检测具有更高的特异性，常用于对高危型HPV检测呈阳性，但细胞学检测结果不明确的患者进行“分流”。如果双染阳性，意味着存在真正需要关注的癌前病变的风险较高，患者需要立即进行阴道镜检查。
Dr.Nicolas Wentzensen
根据美国国家癌症研究所癌症流行病学与遗传学部的Nicolas Wentzensen等人开展的一项长期前瞻性队列研究的结果[1]，对于HPV检测阳性的女性，与单独使用细胞学检测相比，使用双染进行患者分流可以提高宫颈癌前病变的检出率和宫颈癌筛查项目的整体效率。
核心发现：
在HPV检测阳性的女性中，宫颈细胞p16和Ki-67生物标志物染色阳性（也称为双染阳性）的人群，其发生宫颈上皮内瘤变（CIN）3级或更高级别的基线风险为9.4%，而检测阴性的人群该风险为0.8%。
在5年期间，与仅用细胞学检测阳性和阴性的结果（分别为9.7%和5.5%）相比，双染阳性者的CIN3+风险持续较高（14.0%），而双染阴性者的风险持续较低（2.3%）。
在各个年龄组以及接种和未接种疫苗的女性中，均观察到双染检测具有更好的敏感性、特异性和预测性能。
未来纳入双染检测有望改进宫颈癌筛查检测的自动化评估。
双染检测是一种基于新型生物标志物的检测方法，它使用p16和Ki-67两种生物标志物来识别宫颈细胞中的致癌病变。当这两种标志物同时出现时，表明HPV感染已转化为癌前病变。先前的研究表明，对于HPV阳性女性的分流，双染检测是比细胞学检测更好的选择。研究者Dr.Wentzensen在接受《ASCO每日新闻》采访时表示："现在这项最终分析表明，双染不仅比细胞学检测更敏感，而且能保障双染检测阴性的女性更长时间不发生病变，适用于所有年龄段的女性，并且在已接种疫苗的人群中是更好的选择。"
该研究纳入了在北加州凯撒医疗集团宫颈癌筛查项目中筛查出HPV阳性的约10，000名连续入组女性。研究人员评估了双染检测与细胞学检测发现CIN3+的临床性能，并基于5年累积绝对风险构建了预测模型。
在基线时，双染检测阳性女性的CIN3+风险为9.4%，而检测阴性女性为0.8%。相比之下，细胞学检测阳性女性的CIN3+基线风险为6.9%，而检测阴性女性为2.0%。
Dr.Wentzensen说："如果我们在患者分流中使用细胞学检测，肯定会漏诊一些宫颈癌前病变或宫颈癌，因为细胞学检测的敏感性有限。我们还想知道，当细胞学检测阴性时使用双染检测，若结果阴性，能保障未来多长时间内患宫颈癌前病变或宫颈癌的风险极低？"针对这一疑问，为期5年的研究数据给出了明确答案：双染检测阳性女性的CIN3+累积风险持续高于细胞学阳性者，而双染阴性女性的风险则始终维持在更低水平。具体而言，双染阳性女性的5年CIN3+累积风险为14.0%，阴性女性仅为2.3%；相比之下，细胞学检测阳性和阴性女性的对应风险分别为9.7%和5.5%。总体来看，在为期5年的CIN3+筛查中，双染检测在敏感性、特异性及预测价值方面均显著优于细胞学检测（所有对比P<0.001）。
Dr.Wentzensen说："因为女性的转化区（病变的好发部位）会随着她年龄增长逐渐从宫颈口表面“躲”到宫颈管里面去，所以到了中老年，医生想要准确取样、发现隐藏的风险组织，就变得比以前困难得多。"然而，这项研究表明，相比细胞学检测，双染检测在所有年龄段人群的临床表现都更好。在30岁以下女性中，细胞学阳性率为61.2%，随年龄增长逐步下降，至60岁以上降至50.2%。双染阳性率则呈先降后升的趋势：30岁以下为52.2%，40-50岁降至42.1%，60岁及以上又回升至48.9%。在所有年龄段人群中，对于HPV阳性女性，双染阳性结果预测CIN3+准确率均高于细胞学阳性；而对于HPV阴性女性，双染阴性结果始终比细胞学阴性更能有效排除宫颈癌变风险。
Dr.Wentzensen及其同事还研究了双染检测在接种HPV疫苗的人群中的表现。早期疫苗中包含的HPV16和HPV18这两种病毒类型导致了大多数宫颈癌。他说："当高风险HPV基因型（如HPV 16/18）通过疫苗接种从人群中消除后，现有筛查技术的性能特征将发生系统性改变。令人遗憾的是，传统细胞学检查的准确性会因此下降。"双染检测在针对12种高危HPV亚型的分析中展现了卓越的特异性；即使将筛查范围从高危型阳性人群扩展至所有HPV阳性者，检测总频次也仅小幅上升2.3%，显示其在扩大覆盖面的同时依然保持了极高的效率。然而，将双染分流局限于HR12（12种高危HPV亚型）阳性人群，而非覆盖所有HPV阳性女性，会导致阴道镜检查需求上升13%。
最后，Dr.Wentzensen展望，未来双染检测有望与人工智能评估系统深度融合，实现阅片自动化。这不仅将彻底消除人工判读的主观差异，也将为技术的全球化普及铺平道路。Dr.Wentzensen及其同事开发了一种用于双染检测的人工智能分类器，称为Cytoreader。[2]他们目前正在进行一项大型验证研究，以证明Cytoreader作为全球宫颈癌筛查工具的益处。
参考文献
1.Wentzensen N，Egemen D，Clarke MA，et al.Long-term prospective cohort study of cervical cancer screening using triage of HPV-positive women with dual stain and HPV genotyping.J Clin Oncol.Published online February 17，2026.
2.Wentzensen N，Lahrmann B，Clarke MA，et al.Accuracy and efficiency of deep-learning–based automation of dual stain cytology in cervical cancer screening.J Natl Cancer Inst.2021;4;113(1):72-79.
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